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PCR/qPCR耗材選擇的幾個主要因素!
1.塑料耗材組成：
材料
PCR/qPCR耗材通常由聚丙烯制成，因為它是惰性的并且能夠承受熱循環(huán)過程中溫度的快速變化。 聚丙烯的惰性性質(zhì)使其對于反應(yīng)物質(zhì)的吸收降低至最小，確保獲取最佳的PCR結(jié)果。為了進(jìn)一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性，應(yīng)當(dāng)在生產(chǎn)過程中使用全新未循環(huán)使用的醫(yī)學(xué)級或分子生物學(xué)級高品質(zhì)聚丙烯原料。請注意，某些PCR / qPCR板邊框用更強(qiáng)的聚碳酸酯制成，以與高通量機(jī)器人應(yīng)用兼容。
顏色
PCR管和板通?？商峁┒喾N不同的顏色形式，以便于對于樣品的視覺區(qū)分和鑒別，特別是在高通量實驗中。盡管塑料的顏色對DNA擴(kuò)增沒有影響，但在設(shè)置實時PCR或qPCR的反應(yīng)時，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色塑料或磨砂耗材，以實現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測(圖43)。
白色耗材通過阻止熒光折射出管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時，更多的信號被反射回檢測器，從而增加信噪比。此外，白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸收或不一致地反射熒光信號，從而使重復(fù)實驗中的差異降至。由于每個品牌儀器的設(shè)計不同，請遵循廠家建議以獲得最佳性能。比如，對于Bio-Rad和Roche品牌的定量儀器，推薦使用白色耗材用于qPCR。而對于Applied Biosystems熒光定量PCR儀，推薦使用磨砂孔耗材。
PCR/qPCR塑料耗材要點：
PCR/qPCR塑料耗材可提供多種規(guī)格和形式。了解他們相應(yīng)的特點和相關(guān)術(shù)語將會幫助您在使用這些塑料耗材時獲得最佳的PCR和qPCR結(jié)果。
一般屬性
反應(yīng)規(guī)?；蚣訕芋w積
PCR/qPCR塑料耗材的加樣體積決定了可成功進(jìn)行的PCR/qPCR反應(yīng)的規(guī)模(體積)。過量的加樣將會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)的效率下降，溢出以及交叉污染。另一方面，加樣不足則會導(dǎo)致樣品因蒸發(fā)而損耗。加熱模塊也決定了可使用的塑料耗材尺寸以及它們對于完整而有效熱傳導(dǎo)的最佳適配性。PCR/qPCR耗材的最常見體積規(guī)格為：
管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL
96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL
384 孔板：0.02 mL
裙邊：
PCR / qPCR板的“裙"是板周圍的板。裙邊可為反應(yīng)體系構(gòu)建時的移液過程提供較好的穩(wěn)定性，以及在進(jìn)行自動機(jī)械處理時提供更好的機(jī)械強(qiáng)度。PCR / qPCR平板可分為無裙邊，半裙邊和全裙邊。
無裙邊板缺少周圍的面板。這種形式的反應(yīng)板可與絕大多數(shù)PCR儀和實時PCR儀的模塊適配，但不適用于自動化應(yīng)用。
半裙邊板在板的邊緣周圍具有短的邊緣,在移液過程中提供足夠的支撐并且為機(jī)器人處理提供機(jī)械強(qiáng)度。
全裙邊的 PCR / qPCR板具有覆蓋板高度的邊緣面板.這種板形式適用于具有突出模塊的PCR儀(可有利于自動化操作)，可安全穩(wěn)固適配。
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