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使用PCR板時(shí)防止錯誤的幾個技巧
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室中廣為人知的方法之一。PCR 板由的塑料制成，可對收集的樣品或結(jié)果進(jìn)行出色的處理和分析。它們具有薄而均勻的壁，可提供精確的熱傳遞。在為實(shí)時(shí)應(yīng)用做準(zhǔn)備時(shí)，DNA 或 RNA 的微小部分被隔離并儲存在 PCR 板中。
PCR 板在熱封方面非常有效，并且還限制了熱量的流動。然而，由于 PCR 板有效且可靠，在處理樣品時(shí)容易出錯和不準(zhǔn)確。因此，如果您有興趣獲得優(yōu)質(zhì)的PCR板。最好聯(lián)系可靠的 PCR 板制造商。有了這個，您可以確保獲得惠的價(jià)格。以下是一些注意事項(xiàng)，可避免試劑或樣品受到污染，并防止結(jié)果不準(zhǔn)確。
對環(huán)境進(jìn)行消毒
由于存在雜質(zhì)，會出現(xiàn)不正確的陽性或陰性結(jié)果，這會讓您懷疑結(jié)果。
雜質(zhì)和污染物以各種形式出現(xiàn)，例如不相關(guān)的 DNA 或化學(xué)添加劑，最終會降低反應(yīng)的效率和有效性。
有許多方法可以大大降低 PCR 板的污染率。
使用已滅菌的濾芯吸頭是另一種防止雜質(zhì)通過移液器進(jìn)入樣品的有用方法。
提供一套干凈的設(shè)備，包括移液器和架子，專門用于 PCR。這將保證實(shí)驗(yàn)室周圍的雜質(zhì)或污染物轉(zhuǎn)移可忽略不計(jì)。
在移液器、架子和長凳上使用漂白劑、乙醇來擦去污染物。
為所有 PCR 反應(yīng)分配預(yù)留空間，以進(jìn)一步減少顆粒污染。
在每一步都使用干凈的手套并經(jīng)常更換。
PCR 板
檢查模板的濃度和純度。
應(yīng)保持使用 PCR 分析樣品時(shí)使用的工作臺和設(shè)備的清潔度。在分析和處理之前驗(yàn)證樣品的純度至關(guān)重要。
通常，分析儀會考慮 DNA 樣本的濃度和純度水平。
爭取260nm/280nm的吸光度比不得小于1.8。而隨后使用 230nm 和 320nm 之間的波長來識別雜質(zhì)。
在一個例子中，離液鹽和其他有機(jī)化合物在 230nm 的吸收率下被檢測到。同時(shí)在 320nm 的吸光度下檢測和驗(yàn)證 DNA 樣品中的濁度。
避免 PCR 板與產(chǎn)品過載：
盡管希望同時(shí)運(yùn)行多個產(chǎn)品，但它會導(dǎo)致 PCR 板的交叉污染。
用不同的產(chǎn)品使 PCR 板超載會浪費(fèi)，并且很難確定樣品。
保留等分 PCR 試劑的記錄：
連續(xù)冷凍/解凍循環(huán)和頻繁使用等分可能會通過重結(jié)晶損壞 PCR 試劑、酶和 DNTP。
在準(zhǔn)備要分析的樣品時(shí)，始終努力監(jiān)控使用的等分試樣的速率。
優(yōu)選的 LIMS 更適合控制試劑和樣品冷凍或解凍的庫存和數(shù)量。
選擇最佳退火溫度：
選擇和使用錯誤的退火溫度是另一種方法 PCR 結(jié)果包含錯誤。
有時(shí)，反應(yīng)并沒有按計(jì)劃進(jìn)行。需要降低退火溫度以促進(jìn)成功的反應(yīng)。
然而，降低溫度會增加假陽性和引物二聚體出現(xiàn)的機(jī)會。
在使用 PCR 板時(shí)，確認(rèn)熔解曲線的分析具有重要意義，因?yàn)樗沁x擇正確退火溫度的良好指標(biāo)。
引物設(shè)計(jì)軟件輔助設(shè)計(jì)，提供正確的退火溫度，直接減少 PCR 板中的錯誤。
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