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以下是ELISA板包被原理的全面解析，結(jié)合物理吸附與化學(xué)結(jié)合機(jī)制，并附關(guān)鍵操作要點(diǎn)：
一、包被基本原理?
物理吸附作用?
靜電作用?：蛋白質(zhì)在特定pH下與微孔板表面電荷(如聚苯乙烯的負(fù)電性)通過正負(fù)電荷吸引結(jié)合?。
疏水作用?：蛋白質(zhì)疏水基團(tuán)與塑料微孔板的疏水表面自發(fā)吸附，形成穩(wěn)定結(jié)合?。
化學(xué)結(jié)合(可選)?
通過共價(jià)鍵(如戊二醛交聯(lián))或生物素-親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)更牢固的固定，適用于需長(zhǎng)期儲(chǔ)存的試劑盒?。
二、包被操作步驟?
稀釋抗原/抗體?
按說明書稀釋(通常1-10μg/mL)，避免濃度過高導(dǎo)致非特異性吸附?。
加液與孵育?
每孔加入100-200μL稀釋液，4℃過夜孵育(或37℃ 2小時(shí))?。
孵育后棄盡液體，避免殘留影響后續(xù)反應(yīng)。
封閉?
使用1-5% BSA或脫脂牛奶封閉未結(jié)合位點(diǎn)，37℃ 1小時(shí)，減少背景干擾?。
三、關(guān)鍵影響因素?
pH值?：偏中性(pH 7-9)利于蛋白質(zhì)靜電吸附?。
溫度與時(shí)間?：低溫(4℃)延長(zhǎng)孵育可提高結(jié)合效率?。
載體類型?：高結(jié)合力聚苯乙烯板更常用，其他材質(zhì)(如硝酸纖維素)需優(yōu)化條件?。
四、常見問題?
非特異性結(jié)合?：封閉不凈或包被濃度過高可能導(dǎo)致假陽性?。
包被效率低?：可嘗試更換緩沖液(如PBS vs.碳酸鹽緩沖液)或增加孵育時(shí)間?。
以上信息綜合了物理化學(xué)機(jī)制與操作實(shí)踐，適用于直接法、間接法及競(jìng)爭(zhēng)法ELISA實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)?。
注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，如需其他請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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