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酶免反應(yīng)顯色淡、靈敏度偏低的原因及解決方案
一、主要原因分析
標本問題?
目標蛋白濃度過低?：標本中待測物質(zhì)濃度低于檢測下限，導致抗原-抗體結(jié)合不足?。
干擾物質(zhì)存在?：如高濃度脂質(zhì)、血紅蛋白、類風濕因子或防腐劑(如疊氮鈉)抑制反應(yīng)?。
試劑與操作問題?
抗體效價不足?：一抗/二抗保存不當(反復凍融、過期)或稀釋比例不匹配?。
孵育條件不當?：溫度或時間未達標(如37℃孵育不足30分鐘)?。
洗滌不凈：殘留未結(jié)合抗體或干擾物，或洗液配制錯誤(如濃縮洗液未按比例稀釋)?。
儀器與參數(shù)問題?
酶標儀濾光片設(shè)置錯誤?：波長選擇不當(如TMB底物應(yīng)選450nm)?。
顯色時間不足?：TMB底物孵育時間過短(建議15分鐘以上)?。
二、針對性解決方案
優(yōu)化標本處理?
低濃度標本可通過超濾離心濃縮?。
添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本以減少基質(zhì)干擾?。
驗證試劑與操作?
檢查抗體效價，重新滴定工作濃度(如抗體套裝，效價≥1:5000)?。
嚴格控溫控時(37℃振蕩孵育)，避免酶標板干燥?。
規(guī)范儀器使用?
校準酶標儀波長(如TMB底物450nm)?。
延長顯色時間(TMB孵育15分鐘)并避光操作?。
三、擴展閱讀
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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