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如何正確使用小鼠IL-22 ELISA試劑盒?
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種常用的定量檢測技術(shù)，用于測定樣本中小鼠IL-22的濃度?。
試劑盒準(zhǔn)備
在使用前，請將所有試劑盒組分(如標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體、酶結(jié)合物等)從冰箱中取出，在室溫下充分復(fù)溫(通常需要2小時(shí))。濃縮洗滌液若有結(jié)晶，需水浴加熱至溶解。
樣本處理
不同類型的樣本需要不同的處理方法：
細(xì)胞上清?：離心去除細(xì)胞碎片，建議添加蛋白酶抑制劑?。
血清/血漿?：采用肝素、檸檬酸鹽或EDTA抗凝，抽血后30分鐘內(nèi)離心(2000×g，20分鐘)。為消除血小板影響，建議進(jìn)一步離心(10000×g，10分鐘)。
組織勻漿?：需通過裂解液充分裂解細(xì)胞，離心后取上清。
實(shí)驗(yàn)操作流程
典型的ELISA實(shí)驗(yàn)流程如下：
加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，37℃孵育2小時(shí)。
洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液洗滌3次。
加檢測抗體?：每孔加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育1小時(shí)。
加酶結(jié)合物?：每孔加入100μL鏈霉親和素-HRP工作液，37℃孵育30分鐘。
顯色?：每孔加入100μL TMB底物，37℃避光孵育15-20分鐘。
終止與讀數(shù)?：每孔加入50μL終止液，5分鐘內(nèi)在450nm波長測定OD值(建議使用570nm或630nm作為校正波長)。
結(jié)果計(jì)算
通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo))，根據(jù)樣本的OD值計(jì)算其IL-22濃度。建議使用專業(yè)軟件(如Origin、ELISACalc等)進(jìn)行四參數(shù)擬合。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)前建議先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定樣本的最佳稀釋倍數(shù)。
所有操作應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，加樣需連續(xù)完成以減少誤差。
顯色底物需避光保存，若已變色請勿使用。
終止液具有腐蝕性，需避免接觸皮膚和眼睛。
希望這些信息能幫助您順利完成實(shí)驗(yàn)!如果您對某個(gè)具體步驟有更深入的疑問，可以隨時(shí)提出。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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