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Elisa實(shí)驗(yàn)：如何判斷樣本是否需要稀釋?
在ELISA實(shí)驗(yàn)中，判斷樣本是否需要稀釋是確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵步驟。以下是核心判斷原則和操作流程：
核心判斷原則
目標(biāo)分子濃度預(yù)判?
高濃度樣本?(如血清IgG、疫苗抗體、純化重組蛋白)：通常需要高倍稀釋(如1:100~1:1000)，以避免“鉤狀效應(yīng)"(過量抗原導(dǎo)致信號值反常降低)?。
低豐度樣本?(如細(xì)胞因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子)：建議稀釋倍數(shù)≤1:10或直接使用原液檢測?。
試劑盒性能匹配?
稀釋后樣本的OD值應(yīng)落在標(biāo)準(zhǔn)曲線最高值OD值的半量程內(nèi)(例如標(biāo)準(zhǔn)品最高OD=2.4時，目標(biāo)OD≈1.2)，此時計(jì)算誤差最小?。
標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍需覆蓋樣本預(yù)期濃度，否則需調(diào)整稀釋比例?。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需求?
橫向比較實(shí)驗(yàn)需統(tǒng)一所有樣本的稀釋倍數(shù)，消除基質(zhì)差異?。
時間梯度實(shí)驗(yàn)可根據(jù)預(yù)期濃度變化預(yù)設(shè)差異稀釋方案(如0h 1:10，24h 1:100)?。
操作流程
預(yù)實(shí)驗(yàn)與梯度稀釋?
對未知濃度樣本進(jìn)行初步稀釋(如1:10、1:100、1:1000)，檢測OD值?。
選擇使OD值接近標(biāo)準(zhǔn)曲線中高濃度點(diǎn)(如OD≈1.2)的稀釋倍數(shù)?。
驗(yàn)證鉤狀效應(yīng)?
若高稀釋倍數(shù)樣本OD值高于低稀釋倍數(shù)，提示存在鉤狀效應(yīng)，需進(jìn)一步稀釋?。
重復(fù)性與精確度評估?
復(fù)孔檢測CV%應(yīng)<20%，若差異大需排查加樣誤差或污染?。
常見問題處理
假陽性?：類風(fēng)濕因子干擾樣本可加熱滅活(100℃ 1分鐘)?。
信號異常?：溶血樣本需棄用，EDTA濃度需<5 mM?。
通過以上原則和流程，可精準(zhǔn)判斷樣本稀釋需求，確保檢測結(jié)果落在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)?。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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