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大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書
以下是關(guān)于大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：
BS-2953 大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒
一、檢測原理
采用雙抗體夾心ELISA法：包被抗大鼠OxLDL抗體的微孔板中依次加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，TMB顯色后顏色深淺與OxLDL濃度成正比。
二、試劑盒組成
主要組分?
預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔或48孔)
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉或液體，含不同濃度梯度)
酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)
顯色液(TMB A/B液)
終止液(硫酸溶液)
濃縮洗滌液(20×或30×)
保存條件?
未開封試劑盒需2-8℃保存，部分組分(如標(biāo)準(zhǔn)品)需-20℃凍存;開封后酶標(biāo)板應(yīng)密封防潮。
三、樣本處理
樣本類型?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、組織勻漿或細(xì)胞上清液。
處理方法?：
血清/血漿：3000轉(zhuǎn)/分離心10-20分鐘去除顆粒物。
組織勻漿：生理鹽水勻漿后離心取上清。
稀釋要求：部分試劑盒需用配套稀釋液按1:1或1:2預(yù)稀釋。
四、實驗步驟
標(biāo)準(zhǔn)品配制?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋為5-7個濃度(如5ng/ml至75ng/ml)。
加樣與孵育?：
每孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育1小時。
洗滌3次后加入酶標(biāo)抗體，再次孵育30分鐘。
顯色與終止?：
加入TMB顯色液避光反應(yīng)10分鐘，后加終止液變黃色。
檢測?：450nm波長測定OD值，空白孔調(diào)零。
五、結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過曲線方程計算后乘以稀釋倍數(shù)。
注意：高濃度樣本可能需二次稀釋以保證線性范圍。
六、注意事項
避免反復(fù)凍融樣本，解凍后需混勻。
洗滌需，防止非特異性結(jié)合。
顯色時間需嚴(yán)格控制，避免過度反應(yīng)。
不同批次試劑盒組分不可混用。
七、局限性
濃度樣本(超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍)需稀釋后重測。
注：以上資料僅供參考，僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
如需具體操作細(xì)節(jié)，建議參考對應(yīng)試劑盒說明書(如48孔/96孔配置可能步驟略有差異)。
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